三七总皂苷干预去势骨质疏松性骨折模型大鼠的

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0 引言 Introduction

近年来，随着中国人口老龄化的不断发展，骨质疏松发病率也逐年上升[1]。骨质疏松的发生与发展可能会引起多种并发症，其中骨质疏松性骨折是临床最为常见、最严重的并发症之一，其修复较为困难，且对患者的身体健康以及生活质量存在严重威胁。因此寻找一种安全有效的治疗骨质疏松性骨折的手段具有重要意义[2-3]。

有研究显示，骨质疏松性骨折在手术治疗的基础上使用药物干预，可改善机体骨形成、骨吸收状况，对骨质疏松性骨折的愈合及恢复具有重要意义[4]。三七在传统中医中是一种使用广泛的药物，其主要成分三七总皂苷具有通络、化瘀、活血、抗血栓、抗凝的药理作用，常用于心脑血管疾病的治疗，也有研究表明，三七总皂苷能够提升骨密度及成骨细胞活性，促进骨折恢复[5]。但是关于三七总皂苷用于骨质疏松性骨折治疗的研究还鲜有报道。作者拟建立去势骨质疏松性骨折大鼠模型，以观察三七总皂苷的治疗效果。

1 材料和方法 Materials and methods

1.1 设计随机对照动物实验。

1.2 时间及地点实验于2019年在贵州中医药大学第一附属医院动物实验室完成。

1.3 材料

动物：50只健康雌性SD大鼠，鼠龄8-10周，平均(8.)周，体质量217-242 g，平均(230.) g，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供(生产许可证号：SCXK(湘)2016- 0002，实验单位使用许可证号：SYXK(湘)2015-0017)。在相对湿度30%-35%、温度(23.)℃，光照12 h/d的环境中喂养大鼠1周。实验于2019-09-23经贵州中医药大学第一附属医院动物实验伦理委员会批准，批准号为(2019)伦审第(58)号。

实验使用的主要试剂和仪器：三七总皂苷购自陕西昂煦

生物科技有限公司；戊巴比妥钠购自上海信裕生物科技有限公司；兔抗大鼠骨形成发生蛋白2抗体、血管内皮生长因子抗体购自Sigma公司；兔抗小鼠骨钙素抗体购自Dako公司；小鼠抗大鼠谷胱甘肽过氧化物酶抗体购自Invitrogen公司；兔抗小鼠过氧化脂抗体购自Selleck公司；大鼠抗小鼠丙二醛抗体购自Hyclone公司；大鼠抗兔Ⅰ型前胶原羧基端前肽、骨特异性碱性磷酸酶抗体购自Gibco公司；小鼠抗兔PI3K、Akt、mTOR抗体购自BD公司；酶联免疫吸附试剂盒购自上海酶联生物科技有限公司；克氏针购自河南省荣贝得医疗器械有限公司(豫食药监械生产许号)，DEXA骨密度检测仪购自南通广创医疗器械有限公司；Micro-CT购自上海钰森生物技术有限公司。

1.4 方法

1.4.1 模型建立及实验动物分组参照李风波等[6]研究中建模方法，并作出适当改动。随机选取10只大鼠作为正常组，其余40只大鼠建立去势骨质疏松性骨折模型。选择背部双侧肋下入路去除大鼠卵巢组织10周后对所有大鼠骨密度进行测定，筛除未发生骨质疏松的大鼠。使用戊巴比妥钠对所有骨质疏松大鼠进行麻醉干预后，于股骨远端外侧、左膝关节内侧做切口，将内侧关节囊切断，使大鼠膝关节及股骨髁间窝暴露于术野之中。将大鼠股骨中远段位置皮肤组织切开分离，使用手术刀将大鼠股骨切断，做横行骨折模型，之后顺行将克氏针置入，穿透大鼠股骨远端髁间窝后逆行置入股骨远端髁间窝穿出，于股骨髁间窝位置将克氏针剪断。最终建模成功37只，将37只去势骨质疏松性骨折模型大鼠随机分为模型组10只以及三七总皂苷低、中、高剂量组各9只。将三七总皂苷与25%葡萄糖注射液中稀释，分别制备10，20，40 mg/kg三七总皂苷溶液，使用10，20，40 mg/kg三七总皂苷溶液灌胃三七总皂苷低、中、高剂量组大鼠。使用3 mL生理盐水灌胃正常组和模型组大鼠。各组大鼠均连续干预10周。

1.4.2 骨密度检测连续干预10周后，对大鼠进行麻醉处理，使用DEXA骨密度检测仪对大鼠右侧股骨骨密度进行检测。

1.4.3 Micro-CT检测对各组大鼠进行Micro-CT扫描，扫面范围包括骨折线上下各200层，之后使用NRecon软件(瑞轩电子科技(上海)有限公司)对断层图像进行三维重建，使用CT Analyser软件(瑞轩电子科技(上海)有限公司)采集骨体积分数、骨痂骨小梁数量、骨小梁厚度和骨小梁分离度。

1.4.4 骨细胞指数的检测使用戊巴比妥钠麻醉大鼠后，将其断头处死，取右股骨中段骨痂组织及骨折周围软骨组织及正常大鼠软骨组织，液氮冷冻后进行切片处理。取大鼠右股骨中段骨痴组织，甲醛固定、脱钙，剖开后脱水处理，石蜡包埋后染色，每张切片选5个视野，统计每个视野中破骨细胞的数量。

文章来源：《动物医学进展》网址: http://www.dwyxjzzz.cn/qikandaodu/2021/0804/501.html